Estudio estructural y funcional del regulador transcripcional sigma-54 dependiente tour

Zusammenfassung

El activador transcripcional sigma54-dependiente TouR regula la expresión del operón tou de Pseudomonas stutzeri OX1 en respuesta a metil-fenoles. TouR pertenece a la familia de reguladores NtrC. Estos reguladores sigma54-dependientes presentan una estructura organizada en varios dominios: 1,- Un dominio central C, altamente conservado, que lleva a cabo las funciones fundamentales para la activación de la transcripción, tales como la unión e hidrólisis del ATP, la multimerización y la interacción con la sigma54-ARNpolimerasa. 2,- Un dominio A N-terminal, característico de cada subgrupo de la familia que está involucrado en la respuesta a señales medioambientales (en el caso de TouR, respuesta a metil-fenoles). 3,- Un dominio D C-terminal responsable de la unión al ADN promotor. 4,- Un dominio-B que aparentemente juega un papel de regulación como conector estructural entre los dominios A y C. La arquitectura molecular de TouR y la respuesta conformacional debida a la unión del metil-fenol están todavía por caracterizar. El objetivo de esta tesis ha sido el de obtener una huella estructural de TouR mediante dicroísmo circular, espectroscopía de fluorescencia y modernización de la estructura tridimensional. Además, para analizar los distintos sub-dominios funcionales, fue generada una colección de variantes de TouR mediante mutagénesis insercional de pentapéptidos a lo largo de toda la molécula, cuya capacidad para activar la transcripción fue evaluada.