Caracteristicas funcional y estructural de las secuencias en cis y factores en trans presentes en la región lcr del gen de tirosinasa de ratón

Resumen

La tirosinasa es la enzima limitante de la síntesis de melanina y constituye un interesante modelo para el estudio de los mecanismos de funcionamiento de los dominios de expresión. Los estudios de la regulación de la expresión del gen de la tirosinasa de ratón constituyen un ejemplo representativo del funcionamiento de los dominios de expresión de mamiferos, para él estudio de su organización dentro de la cromatina nuclear y el establecimiento de su patrón específico de expresión durante el desarrollo y a lo largo de la vida de un organismo. Recientemente la caracterización funcional de elementos reguladores presentes dentro de la LCR (""Iocus control region"") del gen de tirosinasa de ratón, han demostrado la existencia,.de diferentes actividades reguladoras incluyendo un nuevo elemento .aisladpr o protector del dominio. En este trabajo hemos estudiado la rélevancia de las secuencias en cis, presentes en la región 5 del gen de tirosinasa, involucradas en el aislamiento del gen de tirosinasa y de los factores en trans que se unen a esas secuencias dentro de la tCR dellocus de tirosinasa de ratón. Hemos identificado diversos complejos DNA-proteína de unión a la LCR, encQntrándose uno deellos capaz de unirse a una secuencia rica en Guaninas"".el factor CTCF. Este factor ha sido descrito previamente como una proteína aisladora. Aprovechando la publicación del genoma humano y mediante análisis comparativo de secuencias entre humanos y ratones, hemos descubierto una nueva secuencia reguladora ""5' upstream"" del gen de tirosinasa humano, homóloga a la LCR del gen de tirosinasa de ratón, la cual ha resultado ser funcionalrnente activa a nivel celular. Por otro lado, hemos observado el estado de la cromatina en la región LCR, encontrando un patrón de metilación y acetilación que sugiere la transición entre un estado abierto y cerrado de la cromatina de!1tro del dominio de expresión del gen de tirosinasa. Fina