Caracterización de isoformas de la proteína 4.1 identificación de dominios responsables de su localización subcelular

Zusammenfassung

El objetivo a llevar a cabo durante esta tesis ha sido el clonaje y caracterización de un grupo particular de isoformas de la proteína 4.1, aquellas codificadas por mRNAs que carecen del primer sitio de iniciación de la traducción (ATG-1), situado en el exón 2 del gen de 4.1, determinando su composición exónica y su localización intracelular, haciendo especial hincapié en las isoformas con distribución nuclear. Para identificar las señales responsables de la localización subcelular de las diferentes isoformas, se ha llevado a cabo un estudio comparativo entre estas y otras isoformas de 4.1 clonadas en el laboratorio, y de combinaciones de las mismas generadas por técnicas de DNA recombinante. Se ha demostrado que en la línea celular linfoide MOLT-4 coexisten al menos 7 isoformas diferentes de la proteína 4.1 que no se sintetizan a partir del primer sitio de iniciación de la traducción situado en el exón 2 del gen de la proteína 4.1. Estas isoformas se distribuyen predominantemente en el núcleo o en el citoplasma de la célula dependiendo de su composición exónica. Así mismo, en este trabajo se demuestra por vez primera la funcionalidad de un tercer sitio de iniciación de la traducción (ATG-3) localizado en el exón 8 del gen de la proteína 4.1, responsable de la traducción de isoformas de 4.1 de tamaños inferiores a 80 kDa. Por otro lado, se constata la existencia en el núcleo de la célula de isoformas de la proteína 1.4 de tamaño y propiedades bioquímicas distintas. Así, la isoforma 4.1H, con un peso de 80 kDa, pertenece al grupo de proteínas 4.1 que se extraen con Triton X-100, y la isoforma 4.1N, de 55 kDa, es un componente de la matriz nuclear. Las isoformas nucleares de la proteína 4.1 presentan varias señales de localización nuclear actuando de forma cooperativa. La región central de la proteína 4.1, entre las metioninas de los exones 8 y 17, es capaz de localizarse en el núcleo de l