Diferenciacion de celulas madre embrionarias de raton hacia celulas productoras de insulina

Résumé

La diabetes es una de las enfermedades más comunes del mundo, con una prevalencia del 2-5% y en continuo crecimiento. El tratamiento de dicha enfermedad, actualmente incurable, consiste principalmente en dieta equilibrada, ejercicio fisico e inyecciones de insulina. Sin embargo, en los ultimos 5 años se ha conseguido trasplantar islotes pancreáticos en pacientes diabéticos con una tasa de éxito muy alta. Desafortunadamente, existe una gran falta de donantes, pudiendo cubrir unicamente el 1% de los casos de diabéticos. Por es necesario buscar fuentes alternativas para obtener células beta pancreáticas, como puede ser la diferenciación de células madre embrionarias hacia células productoras de insulina. En este trabajo se diseña un protocolo de diferenciación de células madre embrionarias de ratón hacia células productoras de insulina, empleando factores exógenos que dirijan la diferenciación de las células hacia un destino pancreático. A partir de estas células diferenciadas se seleccionan las células productoras de insulina mediante un plasmido que contiene el promotor del gen Nkx6.1, un factor de transcripción específico de la célula beta. Las células resultantes se analizarán a nivel génico mediante RT-PCR, a nivel proteico mediante inmunocitoquímica e radioinmunoanálisis, y funcional mediante estudios de secreción de insulina y trasplante en ratones diabéticos. Como resultado se obtuvieron células que producían insulina y respondieron frente a concentraciones estimulantes de glucosa. Al trasplantar en ratones diabéticos se conseguió normalizar sus glucemias durante todo el tiempo del experimento. Experimentos de inmunohistoquimica y el efecto en la glucemia tras retirar el trasplante mostraron que las células trasplantadas fueron las responsables de la normalización de la glucemia y no una posible regeneración de las células beta del ratón.