Mejora en la detección de aneuploidías y especificidad del diagnóstico genético preimplantacional en biopsias de blastómera y de trofoectodermo en embriones humanos

Résumé

El tema central sobre el cual se desarrolló el presente trabajo de tesis doctoral fue aportar mejoras al diagnóstico genético preimplantacional cromosómico (DGP-A) partiendo de la metodología aplicada en el momento de inicio de la tesis doctoral. La técnica más utilizada para DGP-A al inicio de la presente tesis doctoral era la hibridación fluorescente in situ (FISH; Fluorescent in situ hybridisation). Las dos limitaciones más importantes de esta técnica son el número de cromosomas que se pueden analizar simultáneamente (más comúnmente entre 7 y 9), y la elevada tasa de falsos positivos (Pujol et al. 2004, Colls et al. 2007, Hanson et al. 2009). En la primera fase, se incorporaron rondas adicionales de hibridación para el análisis de la biopsia, con el fin de evaluar si la combinación de varios tipos de sondas ayuda en la reducción de la tasa de falsos positivos anteriormente descrita para esta técnica. Una vez comprobada la mejora en el diagnóstico, estas rondas adicionales de hibridación fueron incorporadas a la rutina diagnóstica. A pesar de haber introducido alguna mejora en la técnica de FISH, la restricción del número de cromosomas que podían ser analizados mediante la técnica de FISH seguía siendo la mayor limitación. Por ello, en la segunda fase de la presente tesis doctoral, se validó una nueva técnica de análisis molecular (array-CGH), que aplicada a DGP-A permitiría analizar con alta sensibilidad y especificidad aneuploidías para los 23 pares de cromosomas simultáneamente. Para validar la técnica de array-CGH, se evaluó la capacidad de detección de aneuploidías de FISH y array-CGH en los mismos tipos de biopsia, así como la tasa de falsos positivos de ambas. Tras la evaluación de los resultados, la técnica seleccionada para ser aplicada en DGP fue array-CGH, ya que la tasa de falsos positivos fue similar, pero la capacidad de detección mayor, al analizar todos los cromosomas simultáneamente. Tras la publicación de los resultados anteriormente expuestos, una nueva corriente en el ámbito del DGP abogaba por el uso de biopsias de trofoectodermo en embriones de día 5. Por ello, en la última fase, la técnica de array-CGH fue aplicada a los dos tipos de biopsia embrionaria predominantes en el momento (día 3 versus día 5), para de esta manera lograr la opción preferible para DGP teniendo en cuenta tanto la técnica a utilizar y como el momento a aplicarla. Los resultados expuestos en la presente tesis doctoral mostraron tasas de falsos positivos similares en ambos tipos de biopsia.