Clonación y regulación de las enzimas del complejo cisteína sintasa de chlamydomonas reinhaardtii.

Abstract

La tesis aborda el estudio de la regulación de las enximas o-Acetilserina (tiol) liasa y Serina acetiltranferasa de Chlamydomonas reinhardtii, a fin de conocer mejor la ruta de asimilación de azufre en dicho organismo.Utilizando diversas técnicas de Biología Molecular, se han aislado los genes que codifican dichas enzimas en este alga verde, y se han llevado a cabo estudios de actividdes enzimáticas y nivel de expresión génica en dicho organismo bajo diferenes condiciones nutricionales de azufre y nitrógeno. Otro de los aspectos abordados en esta Tesis ha sido la obtención de anticuerpos policlonales frente a la enzima O-Acetil serina (tiol) liasa de Chlmydomonas, reinhardtil, con objeto de completar los estuidos de regulación, y estudiar los niveles de dicha enzima a nivel de proteína en diferentes condiciones nutricionales así como en células sometidas a limitación de azufre. Todos los estudios realizados epara la estirpe silvestre de este alga verde, se llevaron también a cabo en dos estirpes mutantes sacl y sac3 de chlamydomonas, que se caracterizan por presentar una respuesta anormal a la limitación nutricional. Los reultados obtendios sugieren un cierto acoplamiento regulatorio entre los mtabolismos de azufre y el nitrógeno, y además muestra una coregulación de ambas enzimas, Serina acetiltransferasa y O-Acetil serina (tiol) liasa en Chalmydomonas reinhardtii. Chlamydomonas presenta además una mayor capacidad para climatarse a la limitación nutricional de azufre, siendo su respuesta rápida casi a partir de la primera hora de tratamiento. También se ha puesto a punto en esta Tesis la determinación de actividad enzimática SAT en extractos crudos de este organismo.