Clonación posicional de l7Rn6, un gen que codifica una nueva proteína requerida para la función de las células Clara durante el desarrollo pulmonar en el ratón

Resumen

CLONACIÓN POSICIONAL DE l7Rn6, UN GEN QUE CODIFICA UNA NUEVA PROTEINA REQUERIDA PARA LA FUNCIÓN DE LAS CÉLULAS CLARA DURANTE EL DESARROLLO PULMONAR EN EL RATÓN El análisis de mutantes constituye un medio importante para discernir la función génica y dilucidar rutas moleculares. El presente trabajo de investigación ha conllevado a la identificación, mediante un abordaje de genética clásica y clonación posicional, del gen l7Rn6, el cual codifica una nueva proteína requerida para la función de las células Clara en el desarrollo pulmonar del ratón. Las células Clara, altamente secretoras, desempeñan un papel crucial en la protección del pulmón contra el estrés oxidativo e Inflamación. La clonación posicional del alelo letal perinatal l7Rn64234SB reveló que éste contiene una mutación sin sentido en el gen l7Rn6 (previamente gen hipotético NM_026304). l7Rn6 codifica a una proteína de 197 aminoácidos que está altamente conservada en la evolución y ampliamente expresada en el ratón. La mutación Í7Rn64234SB es una transversión T ? A en la posición 543 del marco de lectura abierto de l7Rn6, y sustituye a un codón de tirosina por un codón de terminación prematuro (Y181X), el cual trunca a la proteína l7Rn6 en sus últimos 17 aminoácidos. La mutación l7Rn64234SB parece causar inestabilidad a la proteína l7Rn64234SB, ya que mientras que los niveles de ARNm fueron equiparables entre animales l7Rn6+/+ y l7Rn64234SB/4234SB, estos últimos mostraron una disminución significativa en la expresión de I7Rn64234SB. Durante el desarrollo embrionario tardío l7Rn6 se expresa en el citoplasma de las células epiteliales pulmonares, mientras que durante el periodo perinatal su expresión se restringe al epitelio bronquiolar. La homocigosidad del alelo l7Rn64234SB pareció no afectar ni el patrón de desarrollo pulmonar, ni el crecimiento, ni la diferenciación celular pulmonar; sin embargo, sí causó un agrandamiento enfisematoso de tos sacos respiratorios distales en animales recién nacidos, y alteró la estructura y función de las células Clara. La fitopatología de las células Clara se caracterizó por una disminución en la expresión de las proteínas de secreción CCSP y SP-B, agrandamiento y desorganización del Aparato de Golgi, y formación de estructuras vesiculares aberrantes. Evidencia adicional del papel que desempeña l7Rn6 en la vía secretora proviene de su localización en el Retículo Endopiásmteo y de la presencia de un motivo KKXX semejante de localización y retención en el Retículo Endoplásmico, en su extremo carboxito terminal. Así, l7Rn6 representa a una nueva proteína requerida para la organización y/o función del aparato secretor en las células Clara en el pulmón del ratón.