Regulación de óxido nítrico sintasa inducible en la citoprotección por pge1 de la muerte celular inducida por d-galactosamina en cultivo primario de hepatocitos de rata

Laburpena

INTRODUCCIÓN La administración de D-galactosamina (D-galN) es un modelo experimental de toxicidad hepática adecuado debdio a su especificidad y a que reproduce el daño hepático observado en hepatitis, fallo hepático fulminante y fallo hepático subfulminante. D-galactosamina bloquea la síntesis de RNA y proteínas y por tanto altera las funciones hepatocelulares. Prostaglandina E (PGE) ejerce un efecto protector frente a la toxicidad y muerte celular inducida en el hígado por D-galN y otros modelos de toxicidad hepática. Además, está demostrado que el tratamiento de PGE1 tiene efectos beneficiosos sobre el fallo hepático fulminante de origen viral en humanos, reduciendo los niveles de transaminasas y mejorando las condiciones de endefalopatía y tasa de protrombina. OBJETIVOS Esta tesis forma parte de una serie de proyectos de investigación que tienen como objetivo estudiar los efectos hepatoprotectores de PGE1, así como la fisiopatolgoía experimental del fallo hepático fulminante. El presente proyecto de tesis tuvo como objetivos estudiar la inducción de muerte celular por D-galN en cultivo primario en hepatocitos de rata y así como los mecanismos de resistencia que la preadministración de PGE1 genera en los hepatocios frente a dicha muerte celular. MATERIAL Y MÉTODOS Los hepatocitos se aislaron de ratas macho tipo Wistar mediante el método clásico de perfusión con colagenasa. Las células se cultivaron en medio Williams E. PGE1 (1uM) se administró 2 horas antes que D-galN (0,3, 5, 40mM). La necrosis celular se e valuó mediante cuantificación de actividad lactato deshirogenasas al medio de cultivo. La apoptosis mediante determinación del grado de framentación de DNA y activación de caspasas. La producción de óxido nítrico (ON) se determinó por cuantificación de nitrato+nitrito, mediante el reactivo de Griess. Los niveles de mRNA y proteína de óxido nítrico sintasa inducible (iNOS) mediante