Tiorredoxinas de escherichia coli y saccharomyces cerevisiaepapel en la expresión génica en respuesta a estrés oxidativo

Resumen

La tiorredoxina (Trx) es una proteína con un papel fundamental en la protección frente a estrés oxidativo. Trx actúa como una disulfuro oxido-reductasa, y su forma oxidada es reducida por NADPH a través de la acción catalítica de la flavoenzima tiorredoxina reductasa (TR). Trx, TR y NADPH forman el sistema Trx, que constituye un sistema general de reducción de disulfuros en proteínas. El sistema Trx , junto con el sistema de glutatión (GSH), regula el estado tiol-disulfuro del citoplasma. En la presente tesis doctoral se han estudiado los patrones de expresión de genes de los sistemas Trx y GSH de E.coli y de S.cerevisiae. Por ello, se aplicaron las metodologías de RT-PCR múltiple y de RT-PCR en tiempo real, que permiten la cuantificación de los niveles de transcrito con gran sensibilidad y repetitividad. Los resultados obtenidos demuestran que los sistemas Trx y GSH de E.coli participan en la inactivación de OxyR, el regulador de la respuesta adaptativa a peróxido de hidrógeno en esta bacteria. Adicionalmente se comprueba que este factor de transcripción incrementa la expresión de genes de los sistemas Trx y GSH. De este modo, se propone un modelo de autorregulación del regulón OxyR. Trx y Grx se aislaron como reductores de la ribonucleótido reductasa (Rrasa). Se demuestra que la expresión del operón, nrdHIEF, que codifica la RRAsa de clase Ib de E.coli y su redoxina específica, puede ser vital bajo ciertas condiciones de crecimiento. Los niveles de transcrito de estos genes varían con la fase de crecimiento y la composición del medio. También se observa un incremento de su expresión como consecuencia de la deficiencia en componentes de los sistemas Trx y GSH y tras la exposición de estrés oxidativo. En cuánto a S. Cerevisiae, el perfil transcripcional de los genes de los sistemas Trx y GSH de la levadura a lo largo de la curva de crecimiento indica que el programa de expresión génica por el ca