Estudio de la regulacion de la expresion genica del factor de transcripcion blimp-1 en celulas plasmaticas humanas

Resumo

INTRODUCCION: La respuesta inmune humoral es mediada por los anticuerpos. Estos son proteínas capaces de reconocer y unirse a moléculas extrañas al organismo ( los antígenos ) y poner en marcha mecanismos que permiten su neutralización. Los anticuerpos son sintetizados y secretadas por un tipo de celular especializado en dicha función, la célula plasmática. Para llevar a cabo dicha tarea estas células poseen un sistema secretor extraordinariamente desarrollado. Las células plasmáticas son el estadio final de la diferenciación de los linfocitos B: la diferenciación de la célula plasmática se inicia cuando el linfocito resulta activado al reconocer al antígeno a través de receptor de antígeno. Este proceso de diferenciación celular está controlado por un conjunto de factores de transcripción, entre los cuales se encuentra el factor Blimp-1, considerado el regulador maestro de dicho proceso de diferenciación. OBJETIVOS: Puesto que Blimp-1 es el regulador maestro de la diferenciación plasmacítica, el estudio de la regulación de su expresión puede aportar una información importante a cerca de la generación de la respuesta inmune homoral. Los objetivos de este proyecto son básicamente la determinación de los elementos cis y trans implicados en la regulación de la transcripción del gen BLIMP1 en células plasmáticas humanas. METODOLOGÍA: Dada la dificultad de aislar un número suficientede células plasmáticas humanas, se utilizaron líneas celulares derivadas de mielomas. Se determinó el inicio de la transcripción del gen mediante protección de ARNasas y "primer extensión". Para la delimitación del promotor mínimo se realizaron experimentos con genes reporteros y trasfecciones mediante electroporación. Los ensayos de retardo en gel se utilizaron para identificar los elementos en cis, recurriendo a ensayos de competencia y mutagénesis. Los ensayos de súper-retardo utilizando anticuerpos específicos permitieron la identificación de los factores de transcripción que intervienen en la regulación de Blimp-1. RESULTADOS: El gen BLIMP1 humano posee un promotor carente de TATA-box y localizado en una isla CpG, con múltiples sitios de inicio de la transcripción. Se determinó una región promotora mínima, de la que forma parte la región no codificante del exón 1 del gen. Una GC-box localizada en la posición -64 es el elemento clave en la activación de la transcripción del gen, demostramos la unión a esta secuencia de los factores Sp1 y Sp3. Además, el factor Egr-1se une a una secuencia solapada con la GC-box. En la región exónica del promotor detectamos la unión del factor PAX5 y demostramos que actúa como inhibidor de la transcripción de BLIMP1. CONCLUSIONES: El factor Sp1 es el principal activador de la transcripción del gen BLIMP1 humano, y el factor PAX5 reprime su expresión en los linfocitos B antes del inicio de la diferenciación plasmacítica.