Análisis de interacciones reguladoras en transducción de señales de nitrógeno mediante el sistema del doble híbrido de levaduras

Resumen

El sistema de dos componentes NtrB-NtrC, implicado en la regulación del metabolismo del nitrógeno en enterobacterias, se ha utilizado ampliamente como modelo en el estudio de la transducción de señales en bacterias. En la presente Tesis Doctoral se aportan nuevos datos sobre su funcionamiento, a través del análisis de las interacciones proteicas que tienen lugar entre dominios de las proteínas NtrB y NtrC, y entre NtrB y otras proteínas de la ruta de transducción de señales de nitrógeno. Los resultados obtenidos, que suponen la primera aplicación del sistema del doble híbrido de levaduras en la caracterización de interacciones físicas entre proteínas implicadas en transducción de señales bacterianas, confirman la utilidad de esta herramienta genética en el estudio de reguladores procarióticos y de las interacciones intra e intermoleculares en las que participan. El potencial demostrado por el sistema del doble híbrido fue aprovechado para la identificación de nuevas proteínas implicadas en transducción de señales de nitrógeno mediante la construcción y escrutinio de genotecas genómicas, obtenidas por restricción parcial con Sau3AI de genoma de Escherichia coli. Como cebo se utilizaron las proteínas NtrB y GlnB. La disponibilidad de la secuencia genómica completa de este organismo modelo y la gran cantidad de información obtenida sobre el comportamiento en el doble híbrido de las proteínas utilizadas como cebo, permitió predecir algunos resultados. Los clones identificados en los escrutinios confirmaron interacciones funcionales conocidas e identificaron nuevas interacciones no descritas con anterioridad, contribuyendo a la construcción de un "interactoma del nitrógeno" en enterobacterias. Estos resultados se discuten en relación a la calidad y representatividad de las genotecas obtenidas, y a la utilidad de la herramienta genética utilizada en este estudio.