Generación de celulas secretoras de insulina a través de la diferenciación in vitro de celulas madre

Resumen

La diabetes mellitus es un desorden metabólico causado por una destrucción autoinmune o mala función de las células beta pancreáticas responsables de la producción y secreción de la insulina. Las alternativas terapéuticas actuales, inyecciones diarias de insulina o transplante de islotes pancreáticos, presentan múltiples inconvenientes. Las células trocales de origen embrionario debido a su alta proliferación y la capacidad de diferenciación hacia todos los tipos celulares del organismo, se presentan como una fuente potencial de células beta para el desarrollo de terapias celulares para la diabetes. En este trabajo demostramos que mediante un sistema de selección del linaje y la adición de factores proteicos expresados durante la embriogénesis del páncreas del día e16.5, favorecen la diferenciación de las células troncales de origen embrionario hacia unas células secretoras de insulina. Para ello células troncales embrionarias de ratón de la línea D3 fueron transfectadas con el constrcutro -geo regulado por el promotor de la insulina humana y unido al gen de resistencia a higromicina bajo el promotor dela fosfoglicerato quinasa. Tras el protocolo de diferenciación y una adecuada selección, las células obtenidas disminuyeron la tasa de proliferación, presentaron una alta expresión de insulina y Pdx-1 y coespresaban junto con la insulina, los marcadores Péptido-C y Glut2 en un alto porcentaje. También mostraron una secreción de insulina y péptido-C regulada por glucosa y otros secretagogos como la tolbutamida. Cuando se transplantaron en animales diabéticos fueron capaces de normalizar los niveles de glucosa durante 6 semanas. Con todo ello en este trabajo se propone un protocolo de diferenciación capaz de obtener un alto porcentaje de células secretoras de insulina de forma regulada y otras características de la célula. Al mismo tiempo, se establece una batería de técnicas necesarias para una caracterización apropiada del f