Desarrollo de herramientas para análisis de biomoléculas mediante espectrometría de masas maldi-tof

Resumen

En el presente trabajo se han desarrollado una serie de técnicas de preparación de muestra y análisis mediante espectrometría de masas MALDI-TOF. El desarrollo de las distintas metodologías ha requerido de un enfoque interdisciplinar que ha podido llevarse a cabo gracias a la colaboración de distintos grupos de investigación. Se han puesto a punto diversas técnicas de preparación de muestra para la detección mediante espectrometría MALDI-TOF de distintos tipos de biomoléculas: ADN, péptidos, proteínas, metabolitos, lípidos. En el campo de la metabolómica se ha conseguido detectar AMPc en ausencia de matriz, empleando bien Desorción en Silicio Poroso o bien nanotubos de carbono en un proceso de dos etapas (purificación y espectrometría de masas). En el área de la lipidómica, gracias al empleo del MBT como matriz ha sido posible detectar una amplia variedad de lípidos, tanto en extractos biológicos como en tejidos, incluyendo especies no detectadas en trabajos publicados previamente empleando otras matrices. Por otro lado, en el presente trabajo ha sido fundamental el empleo de diversas técnicas estadísticas y matemáticas tales como mapa de covarianza, calibrado polinomial y elaboración y búsquedas en base de datos, implementándose los correspondientes algoritmos en los lenguajes de programación Mathematica y Visual Basic. Dichas herramientas se han aplicado con éxito en la caracterización de perfiles proteicos de membranas tipo raft, en la caracterización de proteínas con dominios CBS y en la determinación de la composición lipídica en distintos extractos y tejidos. Para la técnica de Imaging Mass Spectrometry se ha desarrollado un software (HISTOMASS) en colaboración con la empresa de bioinformática NorayBio, orientado específicamente a la elaboración y tratamiento de imágenes mediante espectrometría MALDITOF.