Métodos de aislamiento y fijación de plaquetas humanas: estudio morfométrico, estereológico y citoquímico

Laburpena

En el presente trabajo se ha realizado un estudio en relacion a las posibles modificaciones que se producen en las plaquetas inducidas por los procesos de aislamiento y fijacion que conlleva un analisis a m.E. Se comparan dos metodos de aislamiento: 1. En plasma rico en plaqueta a partir de sangre completa y 2. Tras la realizacion de diversos lavados del prp-citratado. Tras el analisis morfometrico podemos considerar que las plaquetas aisladas segun el metodo 2 estan mejor preservadas. Una vez seleccionado el metodo de aislamiento estudiamos la influencia de tres fijadores comunmente usados para m.E el fijador modificado por nosotros es el que menos altera la morfologia plaquetaria. Estereologicamente, hemos visto que el sccs presenta una mayor dilatacion cuanto mas preservada esta la morfologia plaquetaria. Al contrario la luz del dts esta mas constreñida. Citoquimicamente no hay alteraciones en la caracterizacion de calcio, glucogeno y carbohidrato de superficie ni en la funcionalidad de ciertas actividades enzimaticas. Consideramos que la membrana externa y la del sccs intervienen en el almacenamiento de calcio, junto a los granulos alfa, granulos densos, mitocondrias y dts. La actividad atpasa na-k se localiza en la cara interna de las membranas en contacto directo con el medio externo. No parece haber compartimentacion entre estos dos dominios, a diferencia de lo descrito por otros autores. La actividad campasa aparecio claramente definida en el dts de las plaquetas, y hemos estandarizado un metodo modificado para su deteccion citoquimica. Asimismo comprobamos el efecto inhibidor de la forskolina sobre esta actividad.