Ingeniería genética aplicada a la superproducción de treonina en Saccharomyces cerevisiae

Laburpena

El objetivo de esta Tesis ha sido estimar hasta qué punto es posible optimizar la producción de treonina por S. cerevisiae mediante la manipulación in vitro de genes de su ruta de biosíntesis. Se partía del conocimiento de que el primer paso, catalizado por la aspartato quinasa, producto del gen HOM3, es fundamental en la regulación de la misma, dado que se habían aislado mutantes desregulados en este gen que eran superproductores de treonina. En este trabajo se han caracterizado dos de estos alelos mutantes, HOM3-R2 y HOM3-R6. El trabajo de esta Tesis se ha centrado en dos aspectos. 1) Amplificación de los genes de la ruta. Con el objetivo de determinar la importancia de cada paso de la ruta de biosíntesis de treonina en la producción de este aminoácido, se ha estudiado el efecto que tiene sobre la misma la amplificación individual y conjunta de los genes correspondientes. En este estudio se han incluido los alelos HOM3-R mencionados, bien como objeto de amplificación o como presentes en el genomio de las cepas en las que se amplifican los otros genes. 2) Control de la superproducción de treonina. Con el fin de tratar de restringir la acumulación de treonina a condiciones o periodos determinados, se ha colocado el alelo HOM3-R2 bajo el control de distintos promotores inducibles y se ha analizado la producción de treonina, en condiciones de represión e inducción, por cepas portadoras de las distintas construcciones.