Structural and metabolic aspects of multicellularity in a heterocyst-forming cyanobacterium

Resumen

La multicelularidad ha surgido numerosas veces a lo largo de la evolución, habiendo aparecido en diferentes grupos filogenéticos, incluidas las cianobacterias, un grupo de procariotas que realizan la fotosíntesis oxigénica y exhiben un amplio rango de procesos de desarrollo. Las cianobacterias representan uno de los grupos más diversos del mundo bacteriano, incluyendo organismos con distintas morfologías, desde estirpes unicelulares hasta otras que forman filamentos multicelulares. Algunas cianobacterias filamentosas pueden presentar células especializadas en distintas funciones fisiológicas. En algunos casos, esta diferenciación celular permite que el filamento cianobacteriano lleve a cabo simultáneamente procesos que son funcionalmente incompatibles, como la fotosíntesis oxigénica y la fijación del nitrógeno atmosférico. El objetivo general de esta tesis ha sido el estudio de algunos aspectos estructurales y metabólicos de la multicelularidad en la cianobacteria formadora de heterocistos modelo Anabaena sp. PCC 7120. Las cianobacterias filamentosas formadoras de heterocistos crecen formando cadenas de células (filamentos o tricomas), y presentan proteínas septales, como SepJ, que son elementos importantes para la adhesión celular y la filamentación (el proceso de formación y mantenimiento de los filamentos). Desde un punto de vista estructural, las cianobacterias son organismos didérmicos, presentando dos membranas celulares: la membrana citoplasmática y la membrana externa, esta última rodeando externamente a la capa de peptidoglicano (o saco de mureina). En el caso de las cianobacterias filamentosas, la membrana externa es continua a lo largo del filamento, determinando así un espacio periplásmico continuo que contiene la capa de peptidoglicano. A pesar de que la envuelta celular de las cianobacterias se ha estudiado en detalle recientemente, el papel de esta estructura en la multicelularidad no se había planteado previamente. El Capítulo 1 de esta tesis aborda el posible papel de los componentes de la envuelta celular en la filamentación. Para ello, se ha estudiado la longitud de los filamentos y la respuesta a la fragmentación mecánica de una colección de mutantes de genes relacionados con la formación del peptidoglicano y de la membrana externa, incluyendo dos estirpes con mutaciones en genes que determinan penicillin-binding proteins (proteínas de unión a la penicilina) de clase B generados en este trabajo. Los resultados obtenidos indican que la alteración tanto de los componentes de la capa de peptidoglicano como de la membrana externa afectan a la filamentación, contribuyendo así al crecimiento de Anabaena formando largos tricomas, aunque ninguno de estos elementos de la envuelta celular es tan relevante para la filamentación como la proteína septal SepJ. Los procesos de la fotosíntesis y la fijación del N2 están compartimentados en el filamento diazotrófico, lo que conlleva un intercambio de nutrientes entre las células vegetativas y los heterocistos. Las células vegetativas exportan a los heterocistos productos derivados de la fijación del CO2, como la sacarosa, el glutamato y la alanina, y a su vez los heterocistos aportan a las células vegetativas productos de la fijación del N2 atmosférico. Previamente se había identificado la glutamina como un vehículo de nitrógeno, pero se consideraba que podía haber otros metabolitos nitrogenados adicionales que se transfiriesen de los heterocistos a las células vegetativas. El Capítulo 2 de esta tesis aborda el papel de la cianoficina, un polímero de aspartato y arginina que funciona como reservorio dinámico de nitrógeno, en la fisiología cianobacteriana, y de sus productos derivados como posibles vehículos nitrogenados en el filamento diazotrófico. Los resultados confirman que en Anabaena la ORF all3922 es el gen que determina la isoaspartil dipeptidasa, enzima implicada en el segundo paso de la degradación de cianoficina. En condiciones diazotróficas, la enzima se expresa en las células vegetativas, lo cual implica que el dipéptido ß-aspartilarginina producido por la cianoficinasa en los heterocistos se transfiere intercelularmente a las células vegetativas, donde se hidroliza liberando aspartato y arginina. De este modo, se ha identificado el dipéptido ß-aspartil-arginina como vehículo nitrogenado en el filamento diazotrófico. La arginina es un metabolito importante en la fisiología de las cianobacterias, no sólo porque es un constituyente de la cianoficina sino también porque puede servir como vehículo intercelular de nitrógeno, al menos como parte del dipéptido ß-aspartil-arginina. Sin embargo, el catabolismo de la arginina en las cianobacterias no se conoce en detalle, y sólo se han publicado unos pocos estudios acerca de las enzimas relacionadas con el mismo. En el Capítulo 3 y el Anexo II de esta tesis se han caracterizado dos genes, alr2310, que determina una proteína de la familia de las ureohidrolasas, y alr4995, que determina una proteína perteneciente a la familia de enzimas modificadoras del grupo guanidino, investigándose sus posibles funciones en el catabolismo de la arginina. Los resultados muestran que alr2310 es el gen speB de Anabaena, que determina una agmatinasa cuya inactivación causa un efecto tóxico severo que puede ser consecuencia de una interferencia de la agmatina acumulada en el mutante con la diferenciación de los heterocistos. Se encontró asimismo que la agmatinasa se acumula preferentemente en las células vegetativas durante el crecimiento diazotrófico. Por otra parte, Alr4995 es una nueva enzima que genera prolina a partir de arginina en dos pasos, siendo la ornitina (o la citrulina) un metabolito intermediario de dicha reacción. Los resultados de este trabajo indican que la envuelta celular es esencial para la filamentación en las cianobacterias formadoras de heterocistos, y que éstas presentan características únicas y altamente coordinadas de compartimentación celular de vías metabólicas como estrategia de organización multicelular.