Implicación del sistema odc/poliaminas en el desarrollo prenatal del ratón

Résumé

IMPLICACION DEL SISTEMA ORNITINA DESCARBOXILASA/POLIAMINAS EN EL DESARROLLO PRENATAL DEL RATON Tesis Doctoral. Carlos López García. Marzo 2007. Universidad de Murcia Los objetivos fundamentales de este trabajo se centraron en el estudio de las variaciones de las poliaminas putrescina, espermidina y espermina durante los dos últimos tercios del desarrollo prenatal del ratón en feto, placenta y saco vitelino, así como de diferentes aspectos moleculares relacionados con las enzimas de sus rutas biosintética y de retroconversión y catabolismo, y su posible función en el proceso de desarrollo del embrión, placenta y otros tejidos relacionados, durante la gestación de ratones Swiss CD1. Las poliaminas se determinaron mediante HPLC, las actividades enzimáticas de ornitina descarboxilasa (ODC), diamino oxidasa y S-adenosilmetionina descarboxilasa mediante métodos radiométricos, la proteína ODC mediante western blot e inmunocitoquímica, y la expresión de ARNm de diferentes enzimas y proteínas por medio de RT-PCR semicuantitativa, RT-PCR a tiempo real y análisis de microarrays. La posible implicación de ODC, enzima clave en la ruta biosintética, en el desarrollo gestacional se estudió mediante la utilización de un inhibidor específico de la misma, la alfadifluorometilornitina (DFMO), administrado en diferentes periodos de la gestación. Se demostró que la concentración de las diferentes poliaminas experimentaron variaciones poco acusadas durante la gestación, encontrándose cambios más acentuados en la actividad ODC y en otras enzimas del metabolismo de poliaminas, mediados por mecanismos transcripcionales, traduccionales y postraduccionales. Los resultados pusieron de manifiesto que la anulación del pico de ODC en el conceptus en el día 8 pc produjo un drástico efecto contragestacional, mientras que la inhibición de la actividad durante la segunda mitad de la gestación redujo el contenido de poliaminas en placenta y feto, retrasando el cre