Genética de solutos compatibles en bacterias halófilas moderada.

Resum

La principal estrategia de osmoadaptación desarrollada por las bacterias halófilas moderadas consiste en la acumulación en su citoplasma de los denominados solutos compatibles. Estos compuestos poseen un alto poder estabilizador y protector de enzimas, ácidos nucleicos, membranas, e incluso células enteras, contra la congelación, la desecación, la desnaturalización por calor y la alta salinidad (1). La bacteria halófila moderada Chromohalobacter salexigens posee uno de los rangos salinos de crecimiento más amplios existentes en la Naturaleza, entre 0,18 y 5,5 M de NaCl (2). La acumulación de los solutos compatibles ectoína e hidroxiectoína parece ser la base fundamental de esta extremada tolerancia a la sal. En la presente Tesis Doctoral, se han clonado y secuenciado los genes responsables de la ruta de síntesis de ectoína, encontrándose un operón formado por tres genes: el gen ectA, que codifica la enzima ác.diaminobutírico N-acetiltransferasa, el gen ectB, que codifica la ác. Diaminobutírico transaminasa, y el gen ectC, que codifica la ectoína sintasa. Mediante ensayos de protección por la endonulceasa S1 y Primer Extensión, se ha identificado una región promotora delante del gen ectA, con tres posibles inicios de la transcripción, y una segunda región promotora situada delante de ectB, en la que existe un caurto inicio de transcripción. La construcción de fusiones transcripcionales de las regiones promotoras con el gen lacZ ha permitido cuantificar la actividad de las mismas en función de diversos factores, como la adición al miedo de cultivo de diversos osmoprotectores (ectoína, betaína), de un inhibidor de topoisomerasas, o de hierro, así como de la temperatura de incubación. Asimismo, la actividad de la región promotora situada delante del gen ectA presenta una clara inducción en el inicio de la fase estacionaria de crecimiento, que desaparece en un mutante RpoS- de E.coli, lo que sugiere la