Análisis del secretoma producido por hMSC precondiconadas con proteasas quimericas de veneno de araña.

Résumé

Las células mesenquimales estromales son actualmente la propuesta más común para terapia celular, teniendo unpapel clave en la modulación de la respuesta inmunitaria, para tratar enfermedades autoinmunes e inflamatorias. Estascélulas son capaces de inhibir la proliferación y activación de células proinflamatorias, mientras que promueven lasantiinflamatorias, contribuyendo a la regeneración tisular.En este proyecto estudiamos el secretoma producido por estas células tras estar en contacto con una proteína quimérica delveneno de araña Loxosceles, analizando su respuesta inflamatoria.Para ello, realizamos cultivos celulares de células mesenquimales de tejido adiposo cultivadas en medio químicamente definido,las cuales mantendremos en el tiempo realizando subcultivos hasta alcanzar una cantidad óptima de células. Tras esto,exponemos los cultivos a diferentes concentraciones de tratamiento, en este caso la proteína del veneno de araña. Realizamosrecogidas periódicas del secretoma en el que cuantificamos sus proteínas. Además, cuantificaremos citocinas como, IL1b, IL-6 por ELISA, cuantificación de la actividad de iNOS mediante fluorescencia. Una vez finalizado el tratamiento, recogemos elpellet celular para determinar la expresión de marcadores de apoptosis como caspasa 3, bcl 2, bad/bax, así como activacióndel inflamasoma como IL18, caspasa 1, NLRP3, NLRP1 mediante inmunoblot, marcadores de supervivencia como Ki67, etc.También se realizará análisis por qPCR de beta-defensinas 1, 2 y 3, hepcidina y Ll37.